Skip

Microtime 200 STED



Time-resolved Confocal Fluorescence Microscope with Super-resolution Capability

Get an offer...запросить сервисную поддержку...

In the recent years, super-resolution microscopy has gained more and more attention. It has now evolved beyond the stage of development and permits to investigate biological systems that were formerly obscured by the diffraction limit of light. One of the most popular techniques for super-resolution imaging is Stimulated Emission Depletion (STED)microscopy. STED is usually performed with confocal microscopes and is therefore ideally suited to be added to the MicroTime 200. The integration of STED into the system has been driven towards highest robustness and ease-of-use. The system permits to perform STED microscopy without lengthy alignment preparations while still having the choice to modify the system and use the full capability of the open microscopy platform MicroTime 200.

The MicroTime 200 STD is a time-resolved confocal microscope with single molecule sensitivity and super-resolution capabilities. Hence, numrous applications are possble with this instrument, including:

  • Stimulated Emission Depletion Microscopy (STED) / gated STED
  • Single Molecule Spectroscopy / Detection
  • Time-Resolved Fluorescence 
  • Fluorescence Lifetime Imaging (FLIM) 
  • Phosphorescence Lifetime Imaging (PLIM)
  • Fluorescence Correlation Spectroscopy (FCS) 
  • Fluorescence Lifetime Correlation Spectroscopy (FLCS) 
  • Foerster Resonance Energy Transfer (FRET) 
  • Dual-focus Fluorescence Correlation Spectroscopy (2fFCS) 
  • Pulsed Interleaved Excitation (PIE) 
  • Fluorescence Anisotropy (Polarization)
  • Pattern Matching Analysis 
  • Time-Resolved Photoluminescence (TRPL) 
  • TRPL Imaging 
  • Antibunching

В последние годы флуоресцентной микроскопии сверхвысокого разрешения уделяется все больше и больше внимания. В 2014 году за разработку метода была вручена Нобелевская премия по химии. Его очевидным преимуществом является возможность изучать биологические системы, ранее недоступные для оптических методов из-за дифракционного предела. Одна из наиболее популярных техник микроскопии сверхвысокого разрешения - Stimulated Emission Depletion (STED) microscopy. Съемка в режиме STED может быть осуществлена с использованием конфокального микроскопа, поэтому стала отличным дополнением системы Microtime 200. При этом нет необходимости в длительной настройке микроскопа для перехода в режим STED.


Система возбуждения
• Пикосекундные диодные лазеры (375 нм – 900 нм) с частотой повторов до 80 МГц внутри компактного блока лазеров.
• Одно- или многоканальный лазерный драйвер
• Опционально: возбуждение до 266 нм
• Опционально: внешний лазер (например, титан – сапфировый лазер)

Микроскоп
• Инвертированный микроскоп Olympus IX 73 или IX 83
• Правый порт специальной конструкции для конфокальной микроскопии
• Свободные левый порт и порт на задней панели (например, для широкопольной визуализации или TIRF)
• Предусмотрен блок проходящего света
• Специальный столик для ручного позиционирования образца с диапазоном 25 мм
• стандартный держатель образца для покровных стекол 20 мм x 20 мм
• Опционально: эпифлуоресцентное освещение, опционально: криостат для низкотемпературных измерений
• Опционально: комбинация с атомным силовым микроскопом (АСМ)
Объективы
• Безиммерсионные объективы с увеличением 20x и 40x (стандартные)
• Различные высокотехнологичные объективы (масляно-водяная иммерсия, с воздушным зазором, улучшенные для ИК/УФ, TIRF,
или длиннофокусные объективы)

Детекторы
• Однофотонные лавинные диоды (серия PDM, τ-SPAD)
• Фотоумножительные электронные устройства (серия PMA), гибридные фотоумножители (серия PMA Hybrid)

Сбор данных
• На основе метода подсчета единичных фотонов с временным коррелированием (TCSPC) в уникальном режиме с временной
привязкой и временным разрешением (TTTR)
• Одновременный сбор данных по каналам детектирования в количестве до 4 штук.

Сканирование
• Управляемое компьютером 2-мерное сканирование пьезо-объективом с диапазоном сканирования 80 мкм x 80 мкм с точностью позиционирования 1 нм
• PIFOC для 3-мерной визуализации, диапазон 80 мкм при номинальной точности позиционирования 1 нм
• Опционально: сканирование образца
• Опционально: столик сканирования большой площади с сантиметровым диапазоном

Главный оптический блок
• конфокальная установка детектирования в компактном корпусе с количеством параллельных каналов детектирования до 4 штук
• Специализированное высокотехнологичное дихроичное устройство с повышенной стабильностью
• Все оптические элементы являются легко доступными, регулируемыми и заменяемыми.
• Камера CCD для диагностики пучка и фотодиод для измерений относительной мощности
• Настраиваемые делители пучка и выходные порты для подключения внешних устройств
Программное обеспечение
• Простое в использовании и комплексное программное обеспечение для получения и анализа данных на базе Windows
• 1-, 2-, и 3-мерный сбор данных на основе универсального формата фалов TTTR
• Архивирование данных в рабочем пространстве, временной селектор для всех методов, функции экспорта данных, биннинг, подбор TCSPC (многоэкспоненциальное затухание (от 1 до 5 экспонент), подбор методом наименьших квадратов, подбор MLE, деконволюция IRF, подбор хвоста, анализ ошибок методом бутстрэп)
• Анализ точечного измерения: Подбор FCS, FCCS, FLCS, PIE-FCS, FCS (модели: диффузионные константы, триплетное состояние, конформационная, протонирование, функция рассеянной точки по Гауссу, анализ ошибок методом бутстрэп), калибровка FCS, корреляция антигруппировки/ совпадения, общая корреляция, мерцание (построение гистограмм для режимов вкл/выкл), гистограмма скорости импульсов (PCH), TCSPC с управляемой интенсивностью, отслеживание изменений времени жизни флуоресценции и интенсивности, гистограмма времени жизни, BIFL (комплексный анализ серии импульсов)
• Анализ изображений: FLIM, FLIM-FRET, FRET интенсивности, визуализация анизотропии, визуализация интенсивности флуоресценции (с временной синхронизацией), сопоставление изображений, область исследования (ROI)
• Язык написания сценариев (“STUPSLANG”) для пользовательских алгоритмов анализа, фиттинга и компонентов графического интерфейса.

Silver-coated nanoporous gold skeletons for fluorescence amplification

Lee M.-J., Yang W.-G., Kim J.H., Hwang K., Chae W.-S.
Microporous and Mesoporous Materials, Vol.237, p.60-64 (2017)

Reference to: MicroTime 200, SymPhoTime
Related to: FLIM


Improving analytical methods for protein-protein interaction through implementation of chemically inducible dimerization

Andersen T.G., Nintemann S.J., Marek M., Halkier B.A., Schulz A., Burow M.
Scientific Reports, Vol.006, 27766 (2016)

Reference to: MicroTime 200, LSM Upgrade Kit, SymPhoTime
Related to: FLIM, FRET


Influence of plasmonic array geometry on energy transfer from a quantum well to a quantum dot layer

Higgins L.J., Morocico C.A., Karanikolas V.D., Bell A.P., Gough J.J., Murphy G.P., Parbrook P.J., Bradley A.L.
Nanoscale, Vol.008, p.18170-18179 (2016)

Reference to: MicroTime 200 
Related to: FRET, TRPL


Temperature-dependent luminescent decay properties of CdTe quantum dot monolayers: impact of concentration on carrier trapping

Murphy G.P., Zhang X., Bradley A.L.
The Journal of Physical Chemistry C, Vol.120, p. 26490–26497 (2016)

Reference to: MicroTime 200 
Related to: FLIM, TRPL


Ag colloids and arrays for plasmonic non-radiative energy transfer from quantum dots to a quantum well

Murphy G.P., Gough J.J., Higgins L.J., Karanikolas V.D., Wilson K.M., Garcia Coindreau J.A., Zubialevich V.Z., Parbrook P.J., Bradley A.L.
Optics (2016)

Reference to: MicroTime 200 
Related to: FLIM, TRPL


Molecular organization, localization and orientation of antifungal antibiotic amphotericin B in a single lipid bilayer

Grudzinski W., Sagan J., Welc R., Luchowski R., Gruszecki W.I.
Scientific Reports, Vol.006, 32780 (2016)

Reference to: MicroTime 200, FluoTime 300 
Related to: FLIM, Anisotropy


Spatial inhomogeneity in spectra and exciton dynamics in porphyrin micro-rods and micro-brushes: Confocal microscopy

Chattoraj S., Bhattacharyya K.
Journal of Chemical Sciences, Vol.128, p.1717-1724 (2016)

Reference to: MicroTime 200 
Related to: FLIM


Exploring the HYDRAtion method for loading siRNA on liposomes: the interplay between stability and biological activity in human undiluted ascites fluid

Dakwar G.R., Braeckmans K., Ceelen W., De Smedt S.C., Remaut K.
Drug Delivery and Translational Research, Vol.007, p.241-251 (2016)

Reference to: LSM Upgrade Kit, SymPhoTime 
Related to: FCS


Determination of equilibrium and rate constants for complex formation by fluorescence correlation spectroscopy supplemented by dynamic light scattering and Taylor dispersion analysis

Zhang X., Poniewierski A., Jelińska A., Zagożdżon A., Wisniewska A., Hou S., Hołyst R.
Soft Matter, Vol.012, p.8186-8194 (2016)

Reference to: PicoHarp 300, LSM Upgrade Kit, SymPhoTime 
Related to: FCS


Functional role of T-cell receptor nanoclusters in signal initiation and antigen discrimination

Pageon S.V., Tabarin T., Yamamoto Y., Ma Y., Nicovich P.R., Bridgeman J.S., Cohnen A., Benzing C., Gao Y., Crowther M.D., Tungatt K., Dolton G., Sewell A.K., Price D.A., Acuto O., Parton R.G., Gooding J.J., Rossy J,. Rossjohn J., Gaus K.
PNAS, Vol.1113, p.5454-5463 (2016)

Reference to: MicroTime 200 
Related to: FCS

  • microtime200_brochure_rus small.pdf (Подробная брошюра MicroTime 200 на русском языке)
  • 2016_08_NPR_rapidFLIM_Application_Note.docx (Описание метода rapidFLIM)
  • kundenposter_lsmmt200_final_lowres.pdf (Времяразрешенная флуоресцентная микроскопия. Краткое описание методик)
  • technote_tcspc.pdf (Принцип коррелированного во времени счета единичных фотонов)
  • technote_plim.pdf (Основные принципы PLIM)
  • technote_mt200_spectrograph.pdf (Использование спектрографа Andor Technology с Microtime 200)
  • technote_bruker_afm_mt200.pdf (Использование АСМ Bruker с Microtime 200)
  • appnote_twophotonexcitation.pdf (Особенности FLIM при двухфотонном возбуждении)
  • appnote_flim_overview.pdf (Приложения FLIM)
  • appnote_flim_fret.pdf (Измерения молекулярных расстояний с помощью FRET)